国际干细胞组织

来源于人诱导多能干细胞(hiPSC)的运动神经元(MNs)在各种运动神经退行性疾病的治疗中具有巨大的潜力，因为低排斥风险的移植是可能的。有许多hiPSC分化方案追求模仿运动神经发生的多步骤过程在活的有机体内．然而，这些通常应用病毒载体、饲养细胞或抗生素来产生hiPSC和MNs，限制了它们的翻译潜力。在本研究中，采用无病毒、无饲料和无抗生素的方法对hiPSC进行重编程，并将其保存在符合临床良好生产规范的培养基中。在标准化的、化学定义的、无抗生素的培养基中分化为MNs。通过qRT-PCR、流式细胞术、Western Blot和免疫荧光技术在遗传和蛋白水平检测特异性标志物，不断验证hiPSC、神经元祖细胞和成熟MNs的身份。通过双smad抑制和扩增神经诱导形成MNX1和chat阳性的运动神经元祖细胞。对于成熟，一种旨在直接成熟这些祖细胞的方法与一种包括进一步细化的额外分化步骤的方法进行了比较。尽管两种方法都能产生成熟的MNs，但直接成熟方法似乎更有效。这些结果为两种标准化分化方法用于生成成熟MNs的适用性提供了新的见解，这可能为未来的临床应用铺平道路。

迄今为止，肝细胞癌(HCC)仍然是一个重大的健康负担。由于缺乏早期诊断标志物和多药耐药，使其早期诊断和治疗复杂化。microRNA对HCC癌基因的调控是正在探索的新的诊断和治疗策略之一，尽管治疗剂量的microRNA的传递模式仍然是一个挑战。在本研究中，我们探索了转染miR-27a-3p的脐带间充质干细胞外泌体在HCC中与癌基因GOLM1相互作用并在体外和体内抑制HCC的进展。我们首先测定并比较了miR-27a-3p在HCC的血液、各种细胞系和组织以及相应的正常对照中的表达水平。然后，我们通过生物信息学分析确定miR-27a-3p在HCC中的基因靶点，然后在间充质干细胞中转染上调的miR-27a-3p，并用转染干细胞提取的外泌体处理HCC细胞。然后，我们使用balbc/裸鼠创建了HCC小鼠模型，并同样使用来自miR-27a-3p转染干细胞的外泌体对其进行处理。结果显示，与正常对照组相比，HCC患者的血液、细胞系和组织中的miR-27a-3p下调。来自miR-27a-3p转染间充质干细胞的外泌体在体外和体内均可阻止HCC细胞增殖、侵袭和转移。上调miR-27a-3p通过与靶癌基因GOLM1相互作用和下调GOLM1来预防HCC。 In conclusion, miR-27a-3p is a potential therapeutic target for HCC acting through GOLM1.

高尿酸血症是一种代谢紊乱，对炎症性痛风的发展至关重要，近年来发病率不断上升。新出现的临床研究结果证明，长期无症状高尿酸血症患者有显著的肌腱损伤，但高尿酸血症对肌腱稳态的影响及其相关影响在很大程度上尚不清楚。在这里，我们研究了无症状高尿酸血症是否与跟腱自发破裂有关，以及高尿酸血症对肌腱干/祖细胞(TSPCs)的病理影响。648例闭合性跟腱断裂(ATR)患者血清尿酸(SUA)水平明显高于12559例健康志愿者。在体外研究表明，尿酸(UA)剂量依赖性地降低了大鼠跟腱TSPC的活力，降低了肌腱胶原蛋白的表达，使其结构组织变形，同时显著提高了基质降解酶和促炎因子的转录水平。一致地，在高尿酸血症大鼠模型中发现了跟腱组织结构和功能完整性的显著破坏，以及增强的免疫细胞浸润。转录组分析显示，在高尿酸血症挑战的TSPCs中，代谢应激和组织变性相关基因显著升高。具体来说，AKT-mTOR通路活性降低，自噬信号增强被证实。我们的研究结果表明，无症状的高尿酸血症可能是ATR的易感性，因为它阻碍了TSPCs的正常功能。这些信息可为探索ATR的早期预防和护理提供理论和实验依据。

牙周韧带干细胞(PDLSCs)在正畸牙齿运动(OTM)中发挥重要作用，并能对机械应力做出反应。我们之前的研究表明，牙周炎组织中提取的牙周韧带干细胞(pPDLSCs)比健康组织中提取的干细胞(hPDLSCs)对静态机械应变(SMS)更敏感，并报道了暴露于静态机械应变的pPDLSCs长非编码RNA (lncRNA)表达谱。各种研究已经报道了越来越多的lncrna与间充质干细胞的成骨分化有关。许多研究表明n6-甲基ladenosine (m6A)修饰对lncRNA和mRNA调控细胞行为有重要作用。然而lncRNA和mRNA m6A修饰对PDLSCs的调控作用尚未被研究。因此，我们对暴露于12% SMS的pPLDSCs和hPDLSCs进行了m6A微阵列检测，发现143个lncrna和739个mrna甲基化差异。这些rna被认为参与多种分化和炎症反应。此外，我们发现m6A系统中的必需蛋白METTL3在应变暴露的pPDLSCs中表达水平低于应变暴露的hPLDSCs，并且METTL3促进了pPDLSCs的成骨分化。

癌症衍生的细胞外小泡(sEVs)正在成为癌细胞和m2 -肿瘤相关巨噬细胞(M2-TAMs)之间通过转移lncrna进行细胞间通信的关键介质。我们之前报道过miR-134通过PI3K/AKT通路阻断其靶蛋白LAMC2的表达，并抑制口腔鳞癌(OSCC)中癌症干细胞(CSC)的迁移和侵袭。本研究假设oscc - csc衍生的细胞外小泡(OSCC-CSC-sEVs)通过PI3K/AKT通路靶向LAMC2，转移miR-134的ceRNA，从而促进M2巨噬细胞极化在体外而且在活的有机体内实验方法。结果表明，sev来源于CD133⁺CD44⁺OSCC细胞通过检测几种M2巨噬细胞标记物(CD163、IL-10、Arg-1和CD206)促进巨噬细胞的M2极化⁺CD11b⁺)．在机制上，我们发现lncRNA UCA1通过与miR-134结合，通过靶向LAMC2调节巨噬细胞中的PI3K/AKT通路。重要的是，UCA1的OSCC-CSC-sEV转移靶向LAMC2，促进M2巨噬细胞极化，抑制CD4⁺t细胞增殖与IFN-γ生产在体外而且在活的有机体内．在功能上，我们证明了M2-TAMs通过转移外泌体UCA，从而靶向LAMC2，增强了OSCC的细胞迁移和侵袭在体外OSCC异种移植在裸鼠体内的致瘤性。总之，我们的结果表明UCA1的OSCC-CSC-sEV转移通过lamc2介导的PI3K/AKT轴促进M2巨噬细胞极化，从而促进肿瘤进展和免疫抑制。我们的发现提供了对OSCC- csc分子机制的新认识，并提出了通过靶向CSC-sEVs和m2 - tam治疗OSCC的潜在策略。

目标．骨关节炎是世界上主要的关节疾病。骨关节炎可以通过来自runx2过表达骨髓间充质干细胞(R-BMSCs-Exos)的外泌体治疗。R-BMSCs-Exos可促进关节软骨细胞的增殖、迁移和表型维持。方法．转染Runx2和不转染Runx2的骨髓间充质干细胞。分离并鉴定了来自BMSCs和R-BMSCs的外泌体(BMSCs- exos和R-BMSCs- exos)。测定了增殖、迁移和表型维持在体外并在两组之间进行比较。利用小干扰RNA (siRNA)研究了Yes-associated protein (YAP)的激活机制。确定了外泌体的预防作用在活的有机体内采用三色马尾松和免疫组化染色。结果．R-BMSCs-Exos在YAP被激活的基础上增强关节软骨细胞的增殖、迁移和表型维持。研究表明R-BMSCs-Exos可以预防膝骨关节炎在活的有机体内通过一个兔子模型。结论．研究结果强调了R-BMSCs-Exos在预防骨关节炎方面的功效。对外泌体的潜在来源进行了利弊分析。然后根据分子机制对外泌体进行修饰，以解决其局限性。这种来自改良细胞的外泌体在未来的治疗中具有重要作用。